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什么是文庫構建?

更新時間:2023-10-09點擊次數:2682

基于NGS測序的諸多優點,故此技術在全球測序市場上占有著絕對的優勢位置,而新一代測序(NGS)文庫制備是一體化測序流程中的一個關鍵因素,那么什么是文庫構建呢?讓我們一起來看看吧!

基因文庫是儲存了某種生物的DNA片段的受體菌的集合體。文庫分為儲存全部DNA片段和部分DNA片段,前者叫基因組文庫,后者包括cDNA文庫。

文庫構建的基礎是將目標RNA或DNA制備成可以和測序儀器兼容的形式。從組織或者細胞中將DNA或RNA提取出來,并通過機械破碎或者是酶切法對其進行片段化。如果前面提取的是RNA樣本,則需要將RNA逆轉錄為cDNA。對DNA進行接頭的連接后,一般還會有一個文庫的擴增,即通過PCR來對所需的目的片段進行擴增,然后進行上機測序。

傳統的DNA文庫構建包括:DNA片段化(超聲法)、末端修復、加A、接頭連接和PCR文庫擴增等過程(Figure 1)。整個實驗對DNA起始量、儀器有一定的要求。

新型的文庫構建方法利用轉座酶的轉座原理,對DNA進行片段化并同時加上部分接頭序列,是建庫過程中是一個重大的進步。

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